近日，Cell出版社旗下的STAR Protocols杂志在线发表了我院李建真教授团队题为“Protocol for conditional mutagenesis in zebrafish germ cells using Tol2 transposon and a CRISPR/Cas9-based plasmid system”的实验流程论文。该文详细阐述了生殖细胞特异性基因敲除斑马鱼品系制作过程。
图1 斑马鱼生殖细胞条件性基因敲除的流程图
李建真教授团队之前发现并命名了一种名为性腺升糖素“gonacin (GONAdal Cell placensIN)”的多肽激素，在鱼类生殖和能量代谢中发挥关键作用。研究显示，gonacin由斑马鱼早期生殖细胞分泌，调控食物摄入、葡萄糖释放及卵巢发育。这是脊椎动物中首个具有内分泌功能的生殖细胞激素，其作用连接了能量平衡与生殖过程[1]。为介绍生殖细胞特异性基因敲除斑马鱼品系构建的详细过程，文中详尽介绍了用于斑马鱼生殖细胞条件性基因敲除质粒pcmlc2:GFP-U6:fbn2 gRNA-piwil1:Cas9的构建过程，以及后续的Tol2 mRNA体外转录斑马鱼胚胎显微注射、条件敲除品系鉴定及表型分析（以斑马鱼性腺生殖细胞敲除gonacin为例）等一系列实验流程。
图2基于CRISPR/Cas9的斑马鱼生殖细胞条件性基因敲除质粒示意图
西北师范大学生命科学学院李建真教授为该论文的通讯作者，博士生胡艺璇为第一作者。该研究获得了国家自然科学基金、甘肃省科技重大专项、甘肃省自然科学基金、甘肃省高校产业支撑计划项目的资助。
全文链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2666166724006816
1.Hu Y, Zhao S, Liu Z, Kang T, Hsueh AJW, Li J: Gonacin: A germ cell-derived hormone with glucogenic, orexigenic, and gonadal activities. iScience 2023, 26(10):108065.